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2011年蒙牛黃曲霉素事件讓黃曲霉素走進(jìn)了大眾的視野，黃曲霉毒素(AFT)是迄今發(fā)現(xiàn)的霉菌毒素中毒性大、對(duì)人類健康危害極為突出的一類霉菌毒素，有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2等多種形式,它們存在于土壤、動(dòng)植物、各種堅(jiān)果中，特別是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油產(chǎn)品，對(duì)人和動(dòng)物有強(qiáng)烈的毒性。
黃曲霉素檢測(cè)初以薄層層析法為主，發(fā)展到液相色譜法、微柱法、酶聯(lián)免疫吸附法等多種方法普遍應(yīng)用，其進(jìn)展與新的化學(xué)檢測(cè)手段和新儀器的出現(xiàn)密不可分。這些新方法、新手段的快速應(yīng)用，為黃曲霉毒素的檢測(cè)提供了更廣泛的選擇余地，適應(yīng)了不同的檢測(cè)目的和要求。
薄層分析法(TLC)
TLC法是檢測(cè)黃曲霉素為經(jīng)典的方法，也是以前為常用的方法，至今仍為一些檢測(cè)機(jī)構(gòu)所用，也是一種國(guó)標(biāo)方法。其原理是針對(duì)不同的試樣，用適宜的萃取溶劑將黃曲霉素從試樣中萃取出來(lái)，經(jīng)柱層析凈化后，再在薄板上展開后分離。利用黃曲霉素的熒光特性，根據(jù)熒光斑點(diǎn)的強(qiáng)弱與標(biāo)準(zhǔn)比較確定其含量，對(duì)于一些組分很復(fù)雜的試樣要雙向展開，才能獲得較高的靈敏度。
TLC法設(shè)備簡(jiǎn)單，檢測(cè)費(fèi)用低，但操作繁瑣、費(fèi)時(shí)，萃取和凈化效果不理想，靈敏度差，對(duì)操作人員的身體健康存在較大程度的危害。
液相色譜法(HPLC)
液相色譜法是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)黃曲霉毒素的方法，主要是用熒光檢測(cè)器檢測(cè)，這一檢測(cè)方法將化學(xué)分析與計(jì)算機(jī)技術(shù)相結(jié)合，使自動(dòng)化程度得到極大提高，在實(shí)驗(yàn)空間、人力和儀器都保持不變的情況下，能檢測(cè)更多的樣品。其原理是根據(jù)衍生后的黃曲霉毒素在固定相和流動(dòng)相之間的分配量不同，從而達(dá)到分離的目的，分離后的黃曲霉毒素能發(fā)射特征性熒光，被熒光檢測(cè)器捕獲后得到檢測(cè)。該方法既可采用正相色譜也可采用反相色譜。正相色譜中固定相一般使用硅膠柱，流動(dòng)相使用以50%水飽和的三氯甲烷：環(huán)己烷：乙腈：乙醇。反相色譜固定相為C18，流動(dòng)相為乙酸：乙腈：異丙醇：水(1∶5∶5∶39)。
該法能準(zhǔn)確地分離不同種類的黃曲霉素(例如：AFB1、AFB2、AFG1和AFM1等)，檢測(cè)速度快且定性與定量準(zhǔn)確，檢測(cè)限低，可作為仲裁法使用，但儀器設(shè)備價(jià)格昂貴，前處理方法相對(duì)繁瑣，若用到免疫親和柱則會(huì)使試樣檢測(cè)費(fèi)用增加，對(duì)操作人員的身體健康仍存在一定的危害。
酶聯(lián)免疫法(ELISA)
ELISA法也是近年來(lái)研究開發(fā)出來(lái)的一種較為新穎的方法。ELISA 法測(cè)定黃曲霉毒素時(shí)主要采用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法，原理是將黃曲霉毒素的特異性抗體包被于聚苯乙烯微量反應(yīng)板的孔穴中，再加入待測(cè)樣品及酶標(biāo)已知抗原，兩者與特異性抗體進(jìn)行免疫競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，然后加入酶底物顯色，利用酶標(biāo)儀根據(jù)顯色反應(yīng)顏色的深淺進(jìn)行定量。
該方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)便，所涉及儀器及試劑比較少，回收率高，實(shí)驗(yàn)步驟也比較簡(jiǎn)單，是目前國(guó)內(nèi)外較為先進(jìn)的黃曲霉毒素檢測(cè)方法。但抗體壽命短且需要低溫保存，測(cè)定時(shí)假陽(yáng)性率比較高，適合于大量樣品的篩查。
微柱篩選法
微柱篩選法是將樣品提取液通過由氧化鎂和硅鎂吸附劑組成的微柱層析管，雜質(zhì)被氧化鋁吸附，黃曲霉素被硅鎂吸附劑吸附，在365紫外線下呈藍(lán)紫色熒光，其熒光強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)與黃曲霉素的含量成正比，由于微柱不能分離AFB1、AFB2、AFG1、AFG2，故檢測(cè)結(jié)果為黃曲霉素總量。
微柱法篩選黃曲霉素主要是用來(lái)檢驗(yàn)黃曲霉素是否存在以及快速篩選出超樣品。因此，微柱篩選法不能完成黃曲霉素篩選的整個(gè)過程，僅僅用于定性檢驗(yàn)。
金標(biāo)試紙法
金標(biāo)試紙法，實(shí)際就是一種固相免疫分析法。其原理是利用抗體與抗原的特異性結(jié)合反應(yīng)，可一步檢測(cè)黃曲霉素。
該法可在5～10 min內(nèi)完成對(duì)試樣中黃曲霉素的定性測(cè)定，具有簡(jiǎn)單、快速的特點(diǎn)，且無(wú)須其他儀器設(shè)備的配合，既可在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行檢測(cè)，也可在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行實(shí)地測(cè)定，但是其檢測(cè)的準(zhǔn)確度、精度有待進(jìn)一步的研究。
生物傳感器法
生物傳感器是使用固定化技術(shù)將具有分子識(shí)別能力的生物活性物質(zhì)與物理化學(xué)換能器結(jié)合，可以用來(lái)探測(cè)生物體內(nèi)外的環(huán)境化學(xué)物質(zhì)或與之起特異性交互作用后產(chǎn)生響應(yīng)的一種裝置。其中利用分子間特異親和性制備的親和型生物傳感器為免疫傳感器口。根據(jù)能量轉(zhuǎn)換器所傳導(dǎo)的物理或化學(xué)信號(hào)的不同，免疫傳感器又可分為電化學(xué)免疫傳感器、光學(xué)免疫傳感器、壓電晶體免疫傳感器等。
由于生物傳感器具有選擇性高、響應(yīng)快、操作簡(jiǎn)單、攜帶方便和適合于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，因此各國(guó)科研工作者正積極探索研制新型生物傳感器用于檢測(cè)黃曲霉素。
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